一氧化氮（NO）测定试剂盒(一步法)

一氧化氮在临床上越来越受研究人的关注，因为一氧化碳作为一种信号分子，在人体多个系统发挥重要作用，并与多种重大疾病的发生发展相关，越来越多的研究表明，NO 在治疗心血管疾病和许多其他重大的慢性疾病中具有重要作用，NO 的主要生理功能包括对心血管系统、免疫系统、循环系统、中枢系统和泌尿生殖系统的作用，一氧化氮测试对于临床诊断及疾病发展和疗效监控有潜在的意义。标本收集与试剂准备:1. 血清、血浆样本收集：应使用一次性的无热原，无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可)，血清、血浆 避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。细胞培养液、上清样品收集：取细胞 培养上清液 500ul，4 度，6000rpm 离心5-10min；取上清。组织样品收集：将组织块用 PBS 漂洗干净，制成匀浆液，4 度离心(3500r/min,30min)取上清液。待测样本应尽早检测，2-8℃保存 48 小时；更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存，避免反复冻融。2. 标准品/样品稀释液 (1×) 的配置：1ml 标准品/样品稀释液(10×)+9ml 去离子水。3. 标准品配制：取 8 个 1.5ml 离心管，分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7, blank,每管中各加入标准品/样品稀释液（1×）200ul，第一管 S1 中再加入标准品（40umol/L）200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸 200ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第七管（S7）中吸出 200ul 弃去，第八管为空白对照。4. 样品的准备：取和检测样品相同数量的 1.5ml 离心管并编号，每管中分别加入对应检测样品 100ul。5. 如果检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。检测程序:1. 加 样：微孔板中分别对应加入配置好的标准品及待测样品100ul。2. 加提取液：微孔板中每孔各加入提取液 100ul，室温静置3 分钟。3. 读 数：将微孔板用酶标仪在 540nm 处读 OD 值记录为A1。4. 加显色液：每孔加入显色液 100ul，室温静置反应 5 分钟。5. 读 数：将反应好的微孔板用酶标仪在 540nm 处读 OD 值记录为A2。结果判断与计算：1.OD 值 A2-A1,后根据标准曲线进行计算。2.以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。