谷氨酸(glutamic acid)测定试剂盒（一步法）

谷氨酸，是一种酸性氨基酸，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。谷氨酸无色晶体，有鲜味，主要用于生产味精、香料、以及用作代盐剂、营养增补剂和生化试剂等。 标本收集与试剂准备: 1. 血清、血浆样本收集：应使用一次性的无热原，无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可) ，血清、血浆 避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。细胞培养液、上清样品收集：取细胞 培养上清液 500ul，4 度，6000rpm 离心5-10min；取上清。 组织样品收集：将组织块用 PBS 漂洗干净，制成匀浆液，4 度离心(3500r/min,30min) 取上清液。待测样本应尽早检测，2-8℃保存 48 小时；更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存，避免反复冻融。 2. 标准品/样品稀释液 (1×) 的配置：1ml 标准品/样品稀释液(10×) +9ml 去离子水。 3. 标准品配制：取 6 个 1.5ml 离心管，分别标注 S1,S2,S3,S4,S5, blank,每管中各加入标准品/样品稀释液（1×）100ul，第一管 S1 中再加入标准品（10mg/ml）100ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸 100ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第五管（S5）中吸出100ul 弃去，第六管为空白对照。 4. 样品的准备：取和检测样品相同数量的 1.5ml 离心管并编号，每管中分别加入对应检测样品 100ul。 5. 如果检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建 议做预实验， 以确定稀释倍数)。 检测程序: 1. 加提取液：将配置/分装好的标准品及待测样品放入 1.5ml 离心管架（1.5ml 双面板）上，每管中分别各加入提取液 100ul，震荡混匀后，室温静置20 分钟。 2. 加显色液：每孔加入显色液 400ul，混匀后置恒温箱 60 ℃反应40-60 分钟，或90℃水浴 1-3 分钟，建议用恒温箱，水浴显色较快，不易掌控。（具体显色时间根据显色结果而定）。 3. 读 数：将反应好的样品及标准品，8000 转离心 1 分钟，取上清100ul 对应加入微孔板中，20 分钟内用酶标仪在 570nm 处读 OD 值。 结果判断与计算： 1.所有 OD 值建议减除空白孔值后再进行计算，如空白孔 OD 低于0.1，也可以直接计算。 2.以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。

灵敏度定义为可与零标准品区分的最低检测浓度（LOD），通常按平均值 + 2 倍标准差计算。 标准曲线、CV、回收率和线性范围需以该货号说明书或对应批次质检数据为准。