总谷胱甘肽（T-GSH）测定试剂盒(一步法)

总谷胱甘肽过氧化物酶(Total GlutathionePeroxidase，TGPx)是一种重要的酶类物质，它在人体内发挥着重要的生理作用。TGPx 主要存在于细胞内质网、线粒体和细胞核中，它能够将过氧化氢等有害物质转化为无害的水和氧气，从而保护细胞免受氧化损伤。标本收集与试剂准备:1. 血清、血浆样本收集：应使用一次性的无热原，无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可)，血清、血浆 避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。细胞培养液、上清样品收集：取细胞 培养上清液 500ul，4 度，6000rpm 离心5-10min；取上清。组织样品收集：将组织块用 PBS 漂洗干净，制成匀 浆液，4 度离心(3500r/min,30min)取上清液。待测样本应尽早检测，2-8℃保存 48 小时；更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存，避免反复冻融。2. 标准品/样品稀释液(1×)的配置：1ml 标准品/样品稀释液(10×)+9ml 去离子水。3. 标准品配制：取 8 个 1.5ml 离心管，分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7,blank,每管中各加入标准品/样品稀释液（1X）100ul,第一管 S1 中再加入标准品（5mg/ml)100ul,置于旋涡混合器上混匀后用加样器吸 100ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第七管（S7)中吸出100ul弃去，第八管为空白对照。4. 样品的准备：取和检测样品相同数量的 1.5ml 离心管并编号，每管中分别加入对应检测样品 100ul。5. 如果检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建 议做预实验， 以确定稀释倍数)。检测程序:1. 加提取液：将配置/分装好的标准品及待测样品放入 1.5ml 离心管架(1.5ml 双面板)上，每管中分别各 加入提取液 100ul，震荡混匀后，室温静置10 分钟。2. 加显色液：每孔加入显色液 400ul，混匀后室温静置反应10 分钟，将反应好的样品，8000 转离心 1 分 钟，取上清 100ul 对应加入微孔板中，(如检测样品澄清也可以不离心，直接取上清) 。3. 加 GSH 还原酶：在加好标准品及样品的微孔板中，每孔再加入GSH 还原酶100ul，混匀后室温静置反应 5 分钟。4. 读 数：将反应好的微孔板 30 分钟内用酶标仪在 412nm 处读OD 值。结果判断与计算：1.所有 OD 值建议减除空白孔值后再进行计算，如空白孔 OD 低于0.1，也可以直接计算。2.以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。

灵敏度定义为可与零标准品区分的最低检测浓度（LOD），通常按平均值 + 2 倍标准差计算。 标准曲线、CV、回收率和线性范围需以该货号说明书或对应批次质检数据为准。