丙二醛（MDA）测定试剂盒(一步法)

简介：氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙醛(MDA)。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。丙二醛(MDA)在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸(thiobarbituricacid，TBA)缩合，生成棕红色的三甲川(3.5,5-三甲基恶唑-2.4-二酮)，其最大吸收波长在 532nm。进行比色后可估测样本中 MDA 的含量。 标本收集与试剂准备: 1.血清、血浆样本收集：应使用一次性的无热原，无内毒素试管 (EDTA、柠檬酸盐、肝素抗 凝均可) ，血清、血浆 避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透 明。细胞培养液、上清样品收集：取细胞培养上清液 500ul，4 度，6000rpm 离心 5-10min； 取上清。组织样品收集：将组织块用 PBS 漂洗干净，制成匀 浆液，4 度离心 (3500r/min, 30min) 取上清液。待测样本应尽早检测，2-8℃保存 48 小时；更长时间须冷冻(-20℃ 或-80℃) 保  存，避免反复冻融。 2.标准品/样品稀释液 (1×) 的配置：1ml 标准品/样品稀释液 (10×) +9ml 去离子水。 3.标准品配制：取 7 个 1.5ml 离心管，分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6, blank,每管中各加入 标准品/样品稀释液（1× ) 100ul，第一管 S1 中再加入标准品（200nmol/ml）100ul，置于漩 涡混合器上混匀后用加样器吸 100ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第六管（S6）中 吸出 100ul 弃去，第七管为空白对照。 4.样品的准备：取和检测样品相同数量的 1.5ml 离心管并编号，每管中分别加入对应检测 样品 100ul。 5.如果检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当 倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。 检测程序:   1.加提取液：将配置/分装好的标准品及待测样品放入 1.5ml 离心管架（1.5ml双面板）上， 每管中分别各加入提取液 100ul，震荡混匀后，室温静置 20 分钟。 2.加显色液：每孔加入显色液 400ul，混匀后 90℃水浴 10 分钟。   3.读数：将反应好的样品及标准品，8000 转离心 1 分钟，取上清 100ul对应加入微孔板 中，30 分钟内用酶标仪在 532nm 处读 OD 值。   结果判断与计算： 1.所有OD 值建议减除空白孔值后再进行计算，如空白孔 OD 低于 0.1，也可以直接计算。 2.以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品 OD 值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。  注意事项： 1.请自备 1.5ml 离心管及离心管架等常规检测设备及仪器。 2.检测时所有试剂都要恢复到室温，试剂盒开封后剩余试剂放回袋中 1 个月内用完。 3.实验前请认真仔细阅读此说明书，说明书以试剂盒内纸质版为准。 4.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！

灵敏度定义为可与零标准品区分的最低检测浓度（LOD），通常按平均值 + 2 倍标准差计算。 标准曲线、CV、回收率和线性范围需以该货号说明书或对应批次质检数据为准。